超临界C02法优化番茄红素脂质体的配方工艺（二） 法优方工脂质体包封率增加

（2）单因素试验结果分析

①胆固醇与卵磷脂质量比对包封率的超临影响分析

胆固醇：磷脂(W:W)对脂质体包封率的影响如图2所示，增加胆固醇用量，法优方工脂质体包封率增加，化番当胆固醇：磷脂(W:W)=9:20时，茄红脂质体包封率达到峰值。素脂继续增加胆固醇的质体用量，脂质体包封率降低。超临这是法优方工由于胆固醇具有两亲性，增加胆固醇用量，化番可以在一定程度上提高脂质体的茄红稳定性。此外，素脂胆固醇与磷脂具有较好的质体相容性，可以改善磷脂双分子层膜的超临流动性和通透性。以免双分子层过于紧密，法优方工难包埋。化番此外，胆固醇的嵌入增加了双分子层的表面积，易于番茄红素的包埋。但胆固醇用量过高时，双分子层的刚性增大，表面积变小，不易包埋芯材。

②缓冲溶液pH对包封率的影响分析

pH对脂质体的包封率如图3所示，pH为7.0时，脂质体包封率达到峰值，继续升高pH，脂质体包封率下降。这是因为pH影响脂质体表面电荷，电荷的改变会影响脂质体的结构稳定性。脂质体双分子层变得疏松，孔径变大，使所载药物溶液渗透出来，从而影响芯材的包埋。

③番茄红素与卵磷脂质量比对包封率的影响分析
 

番茄红素：磷脂(W:W)对脂质体包封率的影响如图4所示，脂质体包封率随着番茄红素：磷脂(W:W)的增大，先增大后减小。番茄红素：磷脂(W:W)为1:50时，包封率达到峰值。继续增加番茄红素用量，包封率下降。当番茄红素含量较低时，脂质体有足够的空间对其进行包埋。由于脂质体的载药空间有限，当番茄红素增加到一定程度时，脂质体囊泡空间饱和，药物无法再继续被包埋，所以包封率下降。

（3）响应曲面试验结果分析

①响应曲面试验设计及结果

根据单因素实验结果，以包封率为指标值，按照Box-Benhnken试验设计原理进行3因素3水平的响应面优化试验，试验设计及结果如表2所示。

②方程建立及方差分析

对试验数据进行拟合，得到包封率(Y)对胆固醇：卵磷脂(W:W)(A)，缓冲溶液pH(B)番茄红素：卵磷脂(W:W)(C)的二次多元回归方程为

Y=81.02+13.73A+6.04B+02.93C-10.83AB-5.83AC-6.53BC-11.17A²-9.02B²-18.17C²。

模型方差分析如表3所示，P＜0.0001＜0.01，说明模型极显著，失拟项不显著，说明模型拟合程度高。模型各系数显著性检验如下：A＜0.0001＜0.05，B=0.0009＜0.05，C＜0.0393＜0.05，说明胆固醇与磷脂质量比、缓冲溶液pH、番茄红素与卵磷脂质量比对包封率影响均显著。

③交互作用分析

响应曲面交互作用如图5至图7所示。

LY:PC(W:W)和缓冲溶液pH，CH:PC(W:W)和LY:PC(W:W)，CH:PC(W:W)和缓冲溶液pH对包封率的3D图均呈抛物线状，等高线图呈椭圆状。即LY:PC(W:W)和缓冲溶液pH，CH:PC(W:W)和LY:PC(W:W)，CH:PC(W:W)和缓冲溶液pH的交互作用对包封率都有显著影响。LY:PC(W：W)和缓冲溶液pH交互作用的3D图较陡，且等高线密集。说明LY:PC(W:W)和缓冲溶液pH交互作用对包封率的影响更显著，即LY:PC(W:W)和pH对包封率影响更明显。

（4）验证试验结果分析

模型预测的最优的实验条件为胆固醇与卵磷脂质量比为9:20，pH为6.99，番茄红素与卵磷脂质量比为1:50。为了实际试验条件更易于控制，选择胆固醇与卵磷脂质量比为9:20，pH为7，番茄红素与卵磷脂质量比为0.02:1。进行三次平行试验，得平均包封率为83.43％±1.15％。采用SPSSl7.0进行单样本t检验，t=-2.720，P(双侧)=0.113＞0.05，说明与预测值85.24％相比无显著性差异。表明模型拟合程度高，验证了模型的可靠性。

与目前工业上使用较多的薄膜超声法、高压均质法、乙醇注入法等方法相比，超临界CO₂法制备番茄红素脂质体减少了有机溶剂的加入，操作条件温和，且操作简单易行。因此制得脂质体含有较少的对人体有害的物质，制备出的脂质体结构更加稳定。整个过程无污染物排放，更符合现代化工业生产的要求。番茄红素脂质体能在很大程度上改善番茄红素溶解度低，稳定性差的弊端。对超临界法制备番茄红素脂质体的配方组成进行优化，能提高番茄红素脂质体包封率及稳定性，为制备更符合工业化生产及人体健康，有助于人体消化吸收的脂质体供了新的解决方法。

此外还为番茄红素应用开发提供了理论依据和实验基础。助于人体消化吸收的脂质体供了新的解决方法。此外还为番茄红素应用开发提供了理论依据和实验基础。

三、结论

试验以番茄红素脂质体包封率为指标，采用超临界CO₂法进行番茄红素脂质体的制备。根据单因素试验及响应曲面设计的结果，对超临界法制备番茄红素脂质体的配方组成进行优化。结果表明，番茄红素脂质体的最佳配方组成参数为：胆固醇与磷脂质量比为9：20，磷酸盐缓冲pH为7.0，番茄红素与磷脂质量比为1：50，此条件下得到番茄红素脂质体的包封率为：83.4％±1.15％。

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